离体培养的花药如何消毒？
制作玻片标本对于了解生物的形态结构具有重要意义。玻片标本包括临时玻片标本(如涂片、压片和临时裱贴)和永久玻片标本(如永久裱贴和切片)。
1.涂抹法
涂片法是将材料均匀地涂在载玻片上的一种制作方法。
涂片材料包括单细胞生物、微藻、血液、细菌培养液、动植物松散组织、睾丸、花药等。
涂抹时要注意:(1)载玻片一定要干净。(2)滑道应平整。(3)涂层应均匀。向右滴加载玻片中间的涂抹液，用解剖刀片或牙签均匀涂抹。(4)涂层应薄。用另一张载玻片作推片，用涂抹液沿载玻片表面从右向左轻轻推动(两张载玻片的夹角应为30° ~ 45°)，涂抹成均匀的薄层。(5)固定。必要时可用化学固定剂或干燥法(细菌)固定。(6)染色。亚甲蓝用于细菌，瑞氏染料用于血液。染料溶液应覆盖所有涂漆表面。(7)洗涤。用吸水纸吸收或烘烤。(8)密封。长期保存的加拿大口香糖片。
2.压片法
压片法是将生物材料置于载玻片和盖片之间，施加一定压力使组织细胞分散的一种压片方法。
压片法一般流程:(1)取料。为了观察细胞分裂，应当选择具有旺盛细胞分裂的新鲜组织细胞作为材料。如根尖、茎尖分生组织、骨髓细胞和花药(花粉母细胞)。睾丸(精母细胞)等等。(2)固定。材料固定可根据需要确定，取料后立即压片即可观察，无需单独固定(与染色同步)；如果取材后没有立即检查，可以用固定液(一般用醋酸酒精固定液)固定。固定2 ~ 24小时(视材料而定)，然后用95%乙醇清洗，保存在70%乙醇中备用。(3)隔离。细胞难以分散的材料用水解分离液(如1N HCl或盐酸-酒精精液)处理，一般处理6 ~ 20min，解离后用水冲洗即可染色。(4)染色。染料有很多种。观察染色体常用醋酸品红染色液染色。(5)压片。将材料放在载玻片上，加入一滴水或染料溶液，盖上盖玻片并用拇指轻轻按压。(6)观察。压片后，可以在显微镜下观察。
3.装载方法
加载法是将生物材料整体密封制作载玻片标本的方法，可用于制作临时或永久加载。
包装材料有:微小生物如衣藻、水绵、变形虫、水螅、植物的叶表皮；昆虫的翅膀、脚、口器、人类口腔上皮细胞等。
需要注意的是:(1)拿幻灯片的时候要注意保持平整或者放在平台上。滴水时，水量要适当，以刚好盖过盖玻片为度。(2)用解剖针或镊子将材料展开，不重叠，在同一平面上展平。(3)放盖玻片时，从一侧慢慢盖在水滴上，防止产生气泡。(4)染色时，在盖玻片的一侧滴一滴染色液，用吸水纸从另一侧吸出，使盖玻片下的标本均匀着色。上色后，同样的方法，滴一滴水，吸出染色液，放在显微镜下观察。
二、显微镜的基本实验技术
1.如何使用低倍镜(4X，10X)
显微镜操作主要包括两个方面:(1)光度调节。正确瞄准光线是成功观察物体的首要条件。瞄准时，先抬起聚光镜，打开光圈，转动反光镜。此时，一边看着镜子中的视野，一边调节聚光镜螺丝，直到视野中获得均匀明亮的光线。(2)焦距的调整。对焦时，先将观察截面切片，用螺旋桨对准光孔中心。然后分两步集中注意力。先用粗调器固定好焦距，左眼看目镜，让粗调器慢慢上升，直到能看清标本。然后调整微调器，稍微抬起镜筒，直到物体图像更清晰。
2.如何使用高倍镜(40倍)
(1)将低倍镜中发现的物体图像部分移动到视野中心。(2)转动物镜转换器，使40X物镜对准光孔，转动时从侧面观看物镜，防止镜头压住载玻片。(3)调整微调螺丝，使图像清晰。
3.如何使用油镜(100X)
(l)首先，用低倍镜头找到要观察的精细结构，对于高倍镜头，将该结构移动到视野的中心。(2)下台，在载玻片标本上滴一滴芳香沥青，换油镜。从侧面看油镜，抬起镜台，让油镜浸入芳香的焦油滴中。(3)转动微调螺丝，使图像清晰，观察。(4)观察后，用镜头纸擦去油镜片和载玻片上的芳香焦油，再用少许二甲苯或乙醚/无水乙醇将镜头擦拭干净。
4.安装指针的简单方法
拧开目镜上盖(一个镜片)，剪下一小段头发(其长度约等于目镜半径)，用镊子夹住一端，另一端蘸一点中性胶，粘在目镜内壁的金属光阑(一个铁环)上。稍干后，拧紧上盖即可使用。
三、单细胞的计数方法
在细菌培养和体外细胞培养中，以及在环境监测的血液检查中，经常需要对细菌、细胞、单细胞藻类、原虫、血细胞和花粉进行计数。细胞计数法的原理是在显微镜下直接计算一定体积细胞液的数量，利用所得结果计算出每毫升水中的单个细胞数。具体方法如下:
1.水滴计数法
用一个圆润光滑、大小合适的喷头吸1mL水，然后确定这根吸管能滴下多少滴水(反复进行，直到准确)。这样就可以计算出吸管滴下的每一滴水的体积。用吸管取样时，如果有单个细胞活跃，要用碘杀死后再计数；如果样品浓度太大，难以计数，用倍数稀释到合适的浓度；此外，取样前必须搅拌样品，搅拌后应立即取样。在显微镜下取样计数后，可根据以下公式计算出一滴水中的平均细胞数。
1毫升水中的细胞数=平均计数×每毫升定量移液器的滴数×稀释倍数。
2.血细胞计数板计数方法
血细胞计数板是特制的厚载玻片，中央有两个计数室。每个计票室分为9个大方块(见下图)，每个大方块加盖玻片后面积为1mm2，深度为0.1mm。所以每个大正方形的体积是0.1 mm .另外，中心正方形被双线分割成25个中间正方形。每个中间方块被分成16个小方块进行细胞计数。