高分文章干脆做“质谱流”技术学干货

发了20篇论文，这位女博士转行后的生活更加精彩。博士的一个日常挑战:如何找到合适的细胞分选方法！六条曲线，解决了99%的ELISA数据拟合困难。我问我弟弟如何纯化包涵体，他说...流式细胞术以其多参数、高分辨率和快速检测的优势，广泛应用于许多研究领域和临床诊断，尤其是免疫学研究。美中不足的是，传统流式细胞仪在筛选未知细胞群时，容易陷入“盲人摸象”的尴尬。质谱流动技术可以很好地解决这个问题。通过检测通道的飞跃，可以同时检测40多个指标，实现对细胞更全面的检测。和传统的多色流实验一样，质谱流也需要“烧脑”考虑面板设计，实验前“步步小心”。正所谓一步错，精心策划的实验方案是获得有效数据的关键。下面我们一起来揭秘质谱流程。文末还会有CyTOF/Luminex多检测技术交流会，现场体验质谱流的魅力。

想了解更多关于质谱分流的原理，请看:质谱分流，一个富二代的自白。

特征同位素标记

质谱技术与传统流动技术的主要区别在于使用金属元素及其同位素作为抗体标记。目前主要使用稀土元素、惰性元素、后过渡金属和卤素作为标签。这些元素在细胞中含量很少，不会造成高背景，影响细胞的正常生理功能。目前用作质谱流程标签的主要同位素如下图所示:

这些标记的抗体可用于检测细胞相关生物标志物、细胞活性、细胞功能和细胞周期的表达和修饰。

与传统流相比，质谱流技术中相邻通道的干扰减少了很多，但溢出和泄漏现象仍然存在，这主要是由以下原因造成的:

(1).同位素纯度不够(杂质)。

②.M 1指相邻通道的溢漏，称为丰度灵敏度。简单来说就是质量为M的峰拖尾和质量为M+1和M–1的信号干扰。

③.M+16是指同位素氧化引起的氧化。比如轻镧系元素(139 ~ 160 amu)由于氧化物的形成，对重镧系元素(155~176 AMU)产生干扰。目前通过实验体系的优化，最易被氧化的镧系同位素的干扰降低到3.0%以下。89y，102pd，104pd，105pd，106pd，108pd，110pd，113in。

(一)质谱流动技术干扰信号源示意图[1]

Chevrier S等人使用单个染料微球计算通道间的泄漏矩阵，可作为通道选择的参考，如图B所示:

(b)基于单个染色微珠计算的溢出矩阵。对角线上的值是1。默认情况下，仅计算潜在受影响的通道的泄漏，包括m 1，对应于已知的同位素纯度M+16。单元格中的数字表示该行中的元素泄漏到该列中的通道中的百分比。最后一列中的数字表示在相应通道中接收的溢出和泄漏信号的总量。

面板设计的基本策略

与传统flow一样，对于不同表达丰度的标记，遵循“强弱搭配”的原则，即对于高表达丰度的标记，选择低或中等灵敏度的同位素标记；表达丰度低的标记应选择灵敏度高的同位素标记。

表达丰度低或未知的抗原:

选择高灵敏度通道，如153–176 ln和209Bi；选择一个不会或很少受到其他频道干扰的频道；可以考虑进一步放大信号，如用金属元素标记的生物素二抗或不同克隆数的多种抗体标记同一指标。高度表达的抗原:

选择低敏感度标签(89y，102–110pd，113in，115in)或中等敏感度标签(139–65438)。选择一个不会或很少干扰其他频道的频道；优化抗体浓度，使用满足需求的最低抗体浓度，从而减少对其他通道的干扰。此外，您可以遵循以下规则:

1.相互排斥的抗原(如CD4和CD8)可以排列在干扰通道中。

②.* * *表达的抗原(如CD3和CD4)排列在非干扰通道中。如果不可避免，可以安排下一级(如CD4)去影响上一级通道(如CD3)。

③建立完美的对比。除了实验中必要的对照，可以设置质量减一(MMO)对照，类似于传统的FMO(荧光减一对照)，以判断通道的干扰。

④区分单细胞群和活细胞群。质量流量计没有FSC/SSC参数来区分细胞，因此铱或铑的同位素经常被用作核酸包埋剂来识别整个细胞群，并根据DNA含量来区分粘连物和片段。顺铂(铂)是一种化疗药物，可以与受损细胞膜的价态结合，常用于区分死细胞和活细胞。

技术大咖面对面

由Bio-Techne主办的“2019 CyTOF/Luminex多重检测技术交流会”将在深圳举行。诚邀您与质谱流和Luminex多重检测技术的专家会面，共同探讨其技术原理、实验设计和最新应用。

第一，讲师的风格

傅果教授毕业于澳大利亚墨尔本大学。美国斯克里普斯研究所前科学家。目前就职于厦门大学生命科学学院。他的研究方向是免疫细胞的功能和发育，包括T细胞和B细胞的发育、分化、功能及相关信号转导，病原体与宿主的相互作用，以及肿瘤的免疫监测和治疗。厦门大学拥有国内第一台质谱流量计，傅果教授是国内最早接触质谱流量技术的学术带头人之一。积累了丰富的经验和研究数据，在质谱流动平台上成功开发了新的试剂和方案。郭博士，澳大利亚墨尔本大学博士，澳大利亚联邦科学与工业研究组织博士后。他目前是广州白微生物科技有限公司的技术总监..2005-2010在澳大利亚联邦科学与工业研究组织工作，从事干扰素和细胞因子对免疫系统的作用及相应基因调控的研究。2010 11 10月回国，先后在广东省兽医研究所和广东省实验动物监测所担任项目负责人，从事动物健康检测技术，尤其是Luminex的xMAP和xTAG技术应用于动物健康检测。回国后，* * *申请国家发明专利52项，国际PCT专利11项，授权国家发明专利32项(其中Luminex技术相关专利17项)，发表SCI论文32篇(Luminex技术相关专利9项)。第二，时间表

三、时间和地点

时间:2065 438+2009年5月26日地点:深圳博林喜来登酒店IV。报名咨询。

扫描下方二维码申请报名；或者在生物学家微信官方账号后台回复密码“c0526”申请报名。咨询电话:021-52380373参考资料:[1]。Chevriers等细胞系统2018 may 23；6(5):612-620.e5. [2]。Nat协议。2065 438+08 Oct；13(10):2121-2148.[3].生物大分子12，3997–4010(2011)。[4].Behbehani GK，等临床医学实验室。2017年12月；37(4):945-964.[5].劳拉t唐林，等关节炎研究。2018;20:139.文章来源:Bio-Techne图片来源:Bio-Techne，站酷罗海标题来源:站酷罗海图片byGerd AltmannfromPixabay

主题:生物技术，互斥抗原，* * *表达抗原，死亡细胞，氧化干扰，溢出，特征同位素标记，质谱，铂，铑，铱。